随着全球经济一体化和食品贸易国际化,食品过敏问题具有更大的潜在危险性,因此建立可靠、定量的过敏原检测方法对于确保食品标签的一致性和消费者的安全十分必要。然而因为食物过敏原在食品中的含量少以及可能被食品基质包裹等原因,食物过敏原的生物活性的检测十分困难,另一个检测问题是检测方法的灵敏度,一般来说,不同食物中检测极限要求在1—100ppm(每kg食物中含mg量级过敏性蛋白)。
几乎所有的过敏原(抗原)都是蛋白质或多肽类物质,多肽分子量一般在5-70KDa之间,也有一些过敏原分子量超过200KDa以上。某种食物或食物制品是否存在致敏性,通常是依据确诊敏感个体血清中键合的IgE来判断,一旦过敏原可以确认和纯化,就可以在兔子、老鼠、山羊、绵羊或鸡这些动物中获取抗体,为常规食品分析提供免疫检测方法。
现在,检测食物成品中潜在过敏原有几种技术上的可能性,采用的方法包括直接检测过敏原(蛋白质)自身或检测引起食物过敏可能的标志物,如果理想的标志物就是过敏原蛋白,其化学特性不能很好表达或检测极限达不到要求,则检测过敏原不可行。另外,许多致敏食物中包括多种过敏原蛋白,含量也有所不同。作为潜在过敏食物制品或成分的标记物,特定的蛋白质或DNA片段可以作为靶记进行检测。
以检测蛋白为基础的方法通常包括免疫化学检测方法,例如RAST(radio-allergosorbent test)、EAST(enzyme allergosorbent test)、RIE(rocket immuno-electrophoresis)、免疫印迹(immunoblotting)和ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)。其中RIE和免疫印迹方法是定性和半定量方法,RAST、EAST和ELISA是定量分析方法。现在只有ELISA法因其准确性高、易操作和标准化的可能性等,在常规食品分析中常用。DNA水平上的测试方法是依照多聚酶联反应(PCR)来识别特定的DNA片段,实时(real-time)PCR方法可以得到高精确度的检测结果。
检测方法的选择主要考虑所测试的食品特性(有无可检测的特定抗体或DNA以及可达到的检测极限)以及食品制造过程的加工历史等。以蛋白或DNA为基础的检测方法,不同的食物成品的检出和定量检测上有各自的优、缺点。对于以DNA为检测对象的过敏原检测有不同争议,因为蛋白质是过敏原成分而加工过程会对蛋白、核酸等产生不同影响。
如何查找过敏原?下面就几种常用的检测和定量方法进行讨论:
纤维素试纸测试
纤维素试纸测评是近年来发展起来可以代替ELISA方法的一种测试方法,它具有价格低、快速、方便携带、无须仪器设备、操作简便等特点。目前,试纸测试只是定性方法,有改进的用于测定鸡蛋中过敏原的试纸测定方法,具有高度的专一性和灵敏度,检测限低至0.02 mgkg-1。
生物探测器
使用生物探测器是另一项还未普及应用到食品分析中的技术。生物探测器仪器可以即时测定特定分子之间的反应。把一个目标分子(可能是抗体(蛋白)或DNA片段)固定到传感器的表面,然后定量测定一个或两个分子间的键合反应。这种技术的特点是分析时间短、自动化程度高。生物探测器技术可以用来测定特定的蛋白质或过敏原,也可以用于测定特定的DNA片段。该技术已用于榛子、鸡蛋和牛奶中过敏原的检测。